Группа доктора. Ceron из Института биомедицинских исследований Bellvitge (IDIBELL) использовал модельный организм Caenorhabditis elegans для оптимизации метода, что привело к разработке метода под названием Nested CRISPR. Этот метод без клонирования включает в себя вставку длинных фрагментов ДНК в два этапа.
На первом этапе небольшая часть (менее 200 нуклеотидов) длинного фрагмента вставляется в геном. На втором этапе этот небольшой фрагмент затем служит «гнездом» или «посадочной площадкой» для эффективной вставки более длинного фрагмента (примерно одного килобаза).
Эта недавно опубликованная работа в Genetics, журнале Генетического общества Америки, вызывает беспрецедентный интерес и получила наивысший рейтинг с точки зрения оценки внимания журнала.
Модельные организмы с коротким жизненным циклом, такие как C. elegans позволяют исследователям исследовать как возможности, так и ограничения CRISPR. Эта работа является частью докторской диссертации Джереми Виченсио, получившей стипендию INPhINIT от La Caixa. Джереми вместе с докторантами Кармен Мартинес и Ксенией Серрат выполнили сотни микроинъекций в C. elegans и тысячи генотипов, чтобы убедительно продемонстрировать эффективность нового метода Nested CRISPR.
В качестве молекул ДНК для репарации Nested CRISPR использует коммерческие олигонуклеотиды на первом этапе и универсальные продукты ПЦР на втором этапе.
Это облегчает крупномасштабные эксперименты, позволяя пометить сотни генов флуоресцентными белками. Более того, поскольку вложенный CRISPR является модульным, дополнительные интересующие пептиды или белки также могут быть интегрированы в комбинации с этими флуоресцентными белками.
Например, группа в настоящее время работает над маркировкой этих флуоресцентных белков пептидами, которые позволяют их разложение контролируемым образом.
Наконец, моделирующие заболевания в C. elegans группа под руководством доктора. Ceron из IDIBELL намерен использовать вложенный CRISPR для замены генов в C. elegans со своими человеческими собратьями.
Это подтолкнуло бы к использованию этой небольшой нематоды в качестве многоклеточной модели для изучения влияния человеческих мутаций, связанных с заболеванием. Эта система будет представлять значительный интерес в области персонализированной медицины, поскольку она может быстро и эффективно давать прогноз относительно патогенности мутации или геномной вариации (известной как полиморфизм).